Die Kritiker und Zuschauer liebten sie für ihr komisches Talent - dabei fand sie anfangs niemand komisch. Eigenen Aussagen zufolge wurden Jane Kaczmarek am Anfang ihrer Karriere als Schauspielerin nur "unlustige Rollen" angeboten. Die Wende brachte schließlich die US-TV-Serie "Malcolm mittendrin". Darin wurde die Geschichte einer Familie aus der Sicht des hochbegabten Sohnes Malcolm erzählt, der nicht nur damit zurechtkommen musste, in der unteren Mittelschicht zu leben, sondern auch die Schrecken des Vorstadtlebens aushalten musste. Jane Kaczmarek übernahm dabei in den Jahren 2000 bis 2006 die Rolle der Mutter. Die Comedyserie war nicht nur der Beweis für ihr komisches Talent, sondern markierte zugleich den Durchbruch für die Schauspielerin mit polnischen Wurzeln. Für die Rolle von Malcolm's Mutter Lois konnte sie sich sieben Nominierungen für den "Emmy" sowie drei Nominierungen für den "Golden Globe" auf ihren Steckbrief schreiben.
Begonnen hatte ihre Karriere als Darstellerin aber schon lange vor "Malcolm mittendrin". Nach dem Studium an der "University of Wisconsin-Madison" und der "Yale School of Drama" vertiefte sie ihr Können am "Broadway" in New York. Dort glänzte sie unter anderem in den Stücken "Lost in Yonkers" und "Raised in Captivity". Vor der Kamera debütierte Jane Kaczmarek 1982 in "For Lovers Only". Weitere zahlreiche Fernsehrollen, unter anderem in "Law und Order" oder "Party of Five" schlossen sich an. Im Jahr 2000 schließlich, begann die Ära von "Malcolm mittendrin".
Nach dem Ende der Serie 2006 zeigte die Schauspielerin Präsenz in der Serie "Help Me Help You" sowie 2010 in dem Fernsehfilm "Reviving Ophelia". Privat war Jane Kaczmarek mit dem Schauspieler Bradley Whitford verheiratet, mit dem sie drei Kinder hat.